Gemeinsam haben wir eine neue kinaseunabhängige
puma schuhe Funktion von EGFR / EGFRvIII entdeckt, die zu einer Resistenz gegen Tumormedikamente führt. Die meisten Antikrebsmittel induzieren eher eine intrinsische Mitochondrien-vermittelte Apoptose als eine extrinsische Todesrezeptor-vermittelte Apoptose [19; 20]. Die anti-apoptotischen Mitglieder der Bcl-2-Proteinfamilie, einschließlich Bcl-2, Bcl-xL und Mcl-1, sind Hüter der mitochondrialen Integrität [19; 21; 22].
Umgekehrt wirken die proapoptotischen Mitglieder der Bcl-2-Proteinfamilie durch Antagonisierung der anti-apoptotischen Proteine und umfassen die Multi-BH3-Domänenproteine (Bax, Bak und Bok) und die Nur-BH3-Proteine (Bid, Bim, Bmf und PUMA). Obwohl diese proapoptotischen Proteine funktionell redundant zu sein scheinen, wurde gezeigt, dass ihre Expression tumorspezifisch ist [23], und es
puma damen schuhe wurde kürzlich gezeigt, dass eines der wichtigsten Proteine, PUMA, die durch EGFR-Inhibitoren induzierte Apoptose bei Kopf- und Halskrebs vermittelt [ 24].
Obwohl eine direkte regulatorische Rolle von EGFR / EGFRvIII bei der Apoptose nicht berichtet wurde, wurde
puma sneaker kürzlich gezeigt, dass ErbB4, ein Mitglied der EGFR-Familie von Rezeptortyrosinkinasen, mit dem anti-apoptotischen Bcl-2-Protein interagiert, um die Apoptose zu fördern [ 25]. Die therapeutische Aktivierung des apoptotischen Weges hat sich als attraktive Behandlungsstrategie für eine Reihe von Krebsarten herausgestellt, darunter GBM [26; 27]. Bei GBMs wurde bisher jedoch keine systemische Analyse des Expressionsprofils der proapoptotischen Mitglieder der Bcl-2-Proteinfamilie berichtet, und die Beziehung zwischen diesen proapoptotischen Proteinen und EGFR / EGFRvIII bleibt
puma cali bei GBMs unklar.
(sc-03; Santa Cruz, CA). Die EGFR- und EGFRvIII-Expressionsvektoren wurden zuvor in unserem Labor erzeugt [9] und beide Proteine wurden als Myc-markierte Fusionsproteine exprimiert. Monoklonaler Anti-Myc-Maus-Antikörper wurde von Roche (Indianapolis, IN) gekauft. Der monoklonale Anti-Lamin B-Maus-Antikörper stammte von Calbiochem (San Diego, CA). ²-Actin- und ±-Tubulin-Antikörper wurden von Sigma erhalten.
Der polyklonale Kaninchen-Cox-IV-Antikörper stammte von Abcam (Cambridge, MA), während der polyklonale Kaninchen-PUMA-, Bad-, Bim-, Bmf-, Bok-, pEGFR- (Y1068), Bcl-2-, Bcl-xL- und Mcl-1-Antikörper von Cell Signaling ( Danvers, MA). Alle Transfektionen wurden unter Verwendung von Lipofectamin LTX (Invitrogen, Carlsbad, CA) und FuGENE HD (Roche) durchgeführt. Alle siRNAs wurden von Upstate / Dharmacon (Lafayette, CO) gekauft und die Sequenzen sind 5'-CGGACGACCUCAACGCACA-3 '(humane
puma schuhe damen PUMA-siRNA) und 5'-UGGUUUACAUGUCGACUAA-3' (Kontroll-siRNA). Der Bcl-2 / Bcl-xL-Inhibitor 2-Methoxyantimycin A3 (2-MA A3) wurde von BIOMOL (Plymouth Meeting, PA) gekauft.
Dies wurde durchgeführt, wie wir zuvor beschrieben haben [9]. Für EGFR / EGFRvIII wurden zwei Gewebearrays (Imgenex; IMT-01240 und IMT-01241) immungefärbt. Ein Gewebearray (IMT-01255) wurde zuvor auf EGFR / EGFRvIII gefärbt [9]. Der in IHC verwendete monoklonale Anti-EGFR-Maus-Antikörper erkennt den C-Terminus sowohl von EGFR als auch von EGFRvIII. Für PUMA haben wir alle drei Gewebearrays immungefärbt, die aus 12 normalen Hirngeweben und 101 primären Gliomen bestehen. Die Gewebeschnitte wurden entparaffiniert, dehydratisiert und
einer Antigengewinnung in einem EDTA-haltigen Puffer in einem Ofen unterzogen.
